لدراسة آلية تضاعف الـ ADN وكيفية تنظيمها خلال الدورة الخلوية , نقترح المعطيات التجريبية التالية :
- بعد حقن بيض ضفدعة بـ ADN فيروسي موسوم بـ 3H ,تم وضعها في وسط يحتوي على نيكليوتيدات السيتيدين المشع الحاملة لـ 32P (32p-dCTp) وعلى نيكليوتيدات البروموأوريدين (Brd UTP ) الثقيلة وغير المشعة (البروموأوريدين نظير للتيميدين , يرفع من كثافة ADN الذي يدخل في تركيبه )
- وبعد حضن هذا الوسط ( توفير الظروف الملائمة للنمو) لمدة كافية لحدوث دورة خلوية (الشكل-أ-) أو دورتين خلويتين (الشكل-ب-) , تم أستخلاص الـ ADN الفيروسي من البيض وإخضاعه لعملية الطرد المركزي في وسط متزايد الكثافة يمكن من الفصل بين ثلاث أنواع من اللـ ADN حسب كثافتها :
- ADN لا يحتوي على Brd UTP
- ADN له سلسلة واحدة تحتوي على Brd UTP
- ADN له سلسلتان تحتويان على Brd UTP
تمثل الوثيقة 1 توزيع ADN الفيروسي حسب كثافته بعد الحضن لمدة دورة أودورتين خلويتين
32p-dCTPإعتماد على المعطيات السابقة , حدد الدور الذي يلعبه كل من الستيدين المشع () BrdUTوالبروموأوريدين() في هذه التجربة
ﺗﺤﺪﯾﺪ اﻟﺪور اﻟﺬي ﯾﻠﻌﺒﮫ ﻛﻞ ﻣﻦ :
الستيدين المشع (32p-dCTP): هو وسم ADN الجديد التركيب
ADN) : يسمح بالفصل بين أنواع الـ Brd UTPالبروموأوريدين ( حسب كثافتها إلى ثلاثة انواع (الخفيف، متوسط الكثافة و الثقيل)
إعتمادا على الشكل أ للوثيقة 1 :
قارن كثافة ال ADN الموسوم ب3h مع كثافة ال ADN الموسوم ب 32p
المقارنة:
كثافة ال ADN الموسوم بـ 3H أصغر من كثافة ال ADN الموسوم بـ 32p
ADNفسر نتائج هذه المقارنة , اعتمادا على معلوماتك حول تضاعف الـ
32p الموسوم بـ ADNتفسير نتائج هذه المقارنة : ال ﺟﺪﯾﺪ اﻟﺘﺮﻛﯿﺐ ﯾﺘﻜﻮن ﻣﻦ ﺳﻠﺴﻠة ﺟﺪﯾﺪة ﯾﺪﺧﻞ ﻓﻲ تركيبهBrd UTPوﺳﻠﺴﻠﺔﻗﺪﯾﻤﺔﻣﻮﺳﻮﻣﺔ ب3H الخفيفة فهو أثقل من ADN الأصلي الموسوم بـ3H
اعتمادا على الشكل (ب) للوثيقة 1 و على معلوماتك حسب الاختلاف الموجود بين كثافة قمتي ال ADN الموسومة ب 32P
تفسير الاختلاف :
تحتوي القيمة المتوسطة الكثافة على ADN به سلسلة واحدة حديثة التركيب بدخل في تركيبها BRDUبينمة القمة الثيلة ADN يحتوى على سلسلتان كل واحدة يدخل في تركيبها BRDU
التي يمكن استنتاجها من هذهADN إعتمادا على أجوبتك السابقة , حدد الخاصية الأساسية لتضاعف ال التجربة
يتم بطريقة النصف المحافظADNاﻟﺨﺎﺻﯿﺔ الأﺳﺎﺳﯿﺔ اﻟﺘﻲ ﯾﻤﻜﻦ اﺳﺘﻨﺘﺎﺟﮭﺎ : ﺗﻀﺎﻋﻒ
Cycloheximideموازاة للتجربة السابقة , عندما تتم اضافة مادة السيكلوهيكزميد (), (مادة توقف تركيب البروتين) للوسط السالف الذكر,قبل إخضاعه للحضن ,يلاحظ أن النتائج المحصل عليها بعد دورة خلوية أو دورتين خلويتين كلها مماثلة للشكل أ من الوثيقة 1
خلال الدورة الخلوية ADNأذكر البروتينات الاساسية المتدخلة في كل من بنية الصبغي ومضاعفة ال
اﻟﺒﺮوﺗﯿﻨﺎت الأﺳﺎﺳﯿﺔ اﻟﻤﺘﺪﺧﻠﺔ :
ﻓﻲ ﺑﻨﯿﺔ اﻟﺼﺒﻐﻲ :
ANDاﻟﮭﯿﺴﺘﻮﻧﺎت ﻓﻲﻣﻀﺎﻋﻔﺔ ال
ANDإﻧﺰﯾﻢ ال ﺑﻮﻟﯿﻤﯿﺮاز و إﻧﺰﯾﻤﺎت ﺧﺎﺻﺔ ﻟﻔﻚ اﻟﻠﻮﻟﺒﯿﻦ و ﻛﺴﺮ اﻟﺮواﺑﻂ اﻟﮭﯿﺪروﺟﯿﻨﯿﺔ ﺑﯿﻦ اﻟﻘﻮاﻋﺪ الأزوﺗﯿﺔ
علما أن البيض الملقح يخضع للانقسام الأول , فسر العلاقة بين مفعول السيكلوهيكزميد وغياب القمة (الذروة) الثقيلة للـ ADN
غياب الذورة الخاصة بال ADN الثقيل راجع الى توقف تضاعف ال ADN بسبب توقيف عمل الانزيمات المسؤولة على بسبب توقيف عمل الانزيمات المسؤولة على ذلك عن طريق سيكلوهزمبد .